Tesis

Pengaruh Penambahan Ekstrak Etanol Daun Ficus deltoidea terhadap Ekspresi Gen Bax, Bcl-2 dan Cyclin D-1 serta Viabilitas Sel MCF-7 yang Dipaparkan Doksorubisin Berulang = Effect Ethanol Extract of Ficus deltoidea Leaves Addition on the Expression ofBax, Bcl-2 and Cyclin D1 Genes as Well as the Viability of MCF-7 Cells Exposed to Repeated Doxorubicin.

Latar Belakang : Doksorubisin merupakan salah satu obat yang efektif dalam terapi kanker payudara, namun pada sel kanker yang bermetastasis sering terjadi penurunan sensitivitas sel kanker terhadap doksorubisin setelah paparan berulang. Tanaman Ficus deltoidea telah lama dimanfaatkan secara empiris sebagai antikanker, namun, penelitian terkait penambahannya pada doksorubisin belum dilakukan. Metode : Simplisia daun Ficus deltoidea diekstraksi menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 70%. Ekstrak pekat selanjutnya distandarisasi dengan menguji beberapa parameter spesifik dan non spesifik. Setelah standardisasi, dilakukan studi in silico molecular docking terhadap protein Bax, Bcl-2, dan Cyclin D1. Sel lestari MCF-7 dipaparkan dengan doksorubicin selama 16 hari (MCF-7/Dox). Sel tersebut kemudian mendapatkan perlakuan kombinasi doksorubisin dan EFD. Ekspresi gen Bax, Bcl-2, Cyclin D- 1 dan ekspresi rasio gen Bax/Bcl-2 akan dianalisis menggunakan RT-qPCR. Hasil : Paparan doksorubisin berulang 0,05 µM dapat meningkatkan viabilitas sel MCF-7. Penambahan EFD pada sel MCF-7 tersebut memberikan hasil penurunan ekspresi gen cyclin D-1 secara signifikan, namun tidak dengan bax dan bcl-2. Hasil molecular docking menunjukkan bahwa senyawa kaempferol 3-O-β-D-glucuronopyranosyl methyl ester adalah senyawa yang memiliki interaksi paling kuat dengan protein Bax dan Bcl-2 dan isovitexin-3''- O-glucopyranoside adalah senyawa yang berinteraksi paling kuat dengan protein Cyclin D-1. Kesimpulan : Berdasarkan hasil penelitian ini, maka dapat disimpulkan bahwa EFD tunggal dapat meningkatkan gen bax, sedangkan kombinasi EFD dan doksorubisin mampu menurunkan ekspresi gen cyclin D-1 dan viabilitas sel MCF-7/Dox. Perubahan ekspresi gen tersebut terjadi karena peran senyawa-senyawa yang terkandung pada EFD. Namun perlu dilakukan pemeriksaan pada gen atau protein lain yang berperan dalam apoptosis dan proliferasi sel, uji konfirmasi efek sinergisme/antagonisme dari kombinasi doksorubisin dan EFD serta penelitian lanjutan untuk mengetahui mekanisme aksi EFD sebagai antikanker
Kata Kunci : Bax, Bcl-2, Cyclin D-1, Doksorubisin, Ficus deltoidea


Backgrounds: Doxorubicin is one of the effective drugs in breast cancer therapy, but there is often a decrease in the sensitivity of cancer cells after repeated exposure to the drug. Recent studies suggest the use of a combination of conventional drugs and natural ingredients to prevent decreased sensitivity of cancer cells. The Ficus deltoidea plant has long been used empirically as an anticancer. Method : Ficus deltoidea’s dry leaves were extracted using the maceration method, and the concentrated extract was standardized. After obtaining the list of chemical compounds in an extract from standardization, molecular docking was conducted to Bax, Bcl-2, and cyclin D1 proteins. MCF-7 cell lines will be exposed to doxorubicin for 16 days (MCF-7/Dox). Cell viability percentage and IC50 will be calculated, and Bax, Bcl-2 cyclin D-1 gene expressions, and bax/bcl-2 gene ratio expression will be analyzed using RT-qPCR. Results : Repeated exposure to doxorubicin 0.05 µM can increase the viability of MCF-7 cells with a shift in IC50 and morphological changes in MCF-7 cells. The gene expression analysis results showed that a single EFD could significantly increase bax expression but did not decrease bcl-2 and cyclin D-1. In contrast, combining doxorubicin and EFD could significantly decrease cyclin D-1 gene expression but not Bax and bcl-2. This caused the highest bax/bcl-2 ratio in a single EFD. Molecular docking results show that the compound kaempferol 3-O-β-D-glucuronopyranosyl methyl ester is the compound that has the strongest interaction with Bax and Bcl-2 proteins and isovitexin-3''-O-glucopyranoside is the compound that interacts most strongly with the Cyclin D-1 protein. Conclusion : Based on the results of this study, it can be concluded that a single dose of EFD can increase the bax gene, while the combination of EFD and doxorubicin can reduce the expression of the cyclin D-1 gene. Changes in gene expression occur due to the role of compounds contained in EFD. Further study should be conducted to explore EFD effect on cell proliferation and apoptosis.
Keywords : Bax, Bcl-2, Cyclin D-1, Doxorubicin, Ficus deltoidea