Tesis

Penentuan Inhibitory Concentration Antosianin Ekstrak Bekatul Beras Hitam pada Proliferasi dan Ekspresi Gen ABCA1 dari Galur Sel Kanker Kolorektal Manusia = Determination of Anthocyanins Inhibitory Concentration of Black Rice Bran Extract on Proliferation and ABCA1 Gene Expression of Human Colorectal Cancer Cell Line.

Ekspresi gen adenosine triphosphate-binding cassette subfamily A member 1 (ABCA1) lebih rendah pada kanker kolon sehingga ekspor kolesterol yang terakumulasi di dalam sel-sel kanker oleh protein ABCA1 menjadi berkurang. Studi ini bertujuan mengetahui pengaruh ekstrak bekatul beras hitam yang mengandung antosianin terhadap ekspresi mRNA gen ABCA1 dan proliferasi sel kanker kolorektal. Studi ini dilakukan secara eksperimental pada galur sel HT-29. Antosianin diekstraksi dari serbuk bekatul beras hitam yang dimaserasi menggunakan pelarut etanol yang diasamkan dengan asam sitrat. 12 kelompok konsentrasi ekstrak dan satu kelompok kontrol digunakan untuk menentukan nilai konsentrasi penghambatan 50% proliferasi sel (Inhibitory concentration 50/IC50) dan IC % proliferasi sel masing-masing kelompok berdasarkan uji 3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2Htetrazolium (MTS). Sel HT-29 diintervensi dengan ekstrak kemudian dilakukan pembacaan spektrofotometri 24 dan 48 jam pasca intervensi ekstrak. Satu nilai IC dipilih untuk acuan analisis ekspresi gen. Ada tiga kelompok konsentrasi ekstrak untuk pemeriksaan ekspresi gen, yaitu kelompok IC yang dipilih, kelompok dengan nilai di atas IC yang dipilih, dan kelompok kontrol. Ekspresi gen dianalisis secara kuantitatif relatif menggunakan quantitative polymerase chain reaction (qPCR). IC50 waktu inkubasi 24 jam adalah 1,57 mg/mL dan IC50 waktu inkubasi 48 jam adalah 1,35 mg/mL. Konsentrasi ekstrak bekatul beras hitam yang mengandung antosianin berkorelasi positif sangat kuat dengan aktivitas antiproliferatif dengan waktu inkubasi 24 jam (r=0,97; p = 0,001 )dan waktu inkubasi 48 jam (r=0,95; p = 0,001 ). IC yang dipilih untuk analisis ekspresi gen adalah 1,7 mg/mL dan 2,0 mg/mL. Ekspresi relatif mRNA gen ABCA1 meningkat 2,32 kali lebih tinggi pada konsentrasi ekstrak bekatul beras hitam 2,0 mg/mL dibandingkan kontrol. Intervensi ekstrak bekatul beras hitam yang mengandung antosianin pada sel HT-29 meningkatkan ekspresi mRNA gen ABCA1 dan menghambat proliferasi sel.
Kata Kunci: Antosianin, bekatul beras hitam, galur sel HT-29, proliferasi sel, ABCA1


The expression of the adenosine triphosphate-binding cassette subfamily A member 1 (ABCA1) gene is lower in colon cancer so that the export of cholesterol accumulated in cancer cells reduced by the ABCA1 protein. This study aims to determine the influence of black rice bran extract containing anthocyanins on ABCA1 gene mRNA expression and colorectal cancer cell proliferation. This study was conducted experimentally on the HT-29 cell line. Anthocyanins were extracted from black rice bran powder using ethanol solvent acidified with citric acid. 12 groups of extract concentration and one control group were used to determine the inhibitory concentration of 50% of cell proliferation (IC50) and IC of each group based on the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3- carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS) assay and spectrophotometric readings. HT-29 cells intervened with the extract after 24 and 48 hours of cells incubation. One IC value was selected as a reference for gene expression analysis. There were three groups of extract concentrations for gene expression examination, namely the selected IC group, the group above the selected IC value, and the control group. Gene expression was analyzed quantitatively relative using quantitative polymerase chain reaction (qPCR). The IC50 is 1.60 mg/mL and 1.35 mg/mL (24 and 48 hours of incubation time, respectively). The concentration of black rice bran extract containing anthocyanins is very strongly correlated with antiproliferative activity at 24 and 48 hours of incubation time (r = 0.97; p = 0,001 and r = 0.95; p = 0,001, respectively). The selected ICs for gene expression analysis are 1.7 and 2.0 mg/mL. ABCA1 gene mRNA relative expression increase 2.32 times higher at 2.0 mg/mL of black rice bran extract concentration than control. The intervention of black rice bran extract containing anthocyanin in HT-29 cells increases the ABCA1 gene mRNA expression and inhibits cell proliferation.
Keywords: Anthocyanin, black rice bran, HT-29 cell line, cell proliferation, ABCA1