Tesis

Pengaruh pemberian alpha lipoic acid (ALA) dan prolaktin terhadap integritas DNA dan apoptosis spermatozoa setelah pencucian dengan metode swim up dan density gradient centrifugation = Effect of Alpha Lipoic Acid (ALA) and Prolactin Supplementation on Sperm DNA Integrity after Swim Up and Density Gradient Centrifugation Sperm Preparation.

Latar Belakang: Pencucian spermatozoa dengan metode Swim-Up (SU) dan Density Gradient Centrifugation (DGC) untuk menyeleksi spermatozoa motil telah lama dilakukan, akan tetapi angka keberhasilan masih tergolong rendah. Alpha lipoic acid (ALA) merupakan antioksidan biologis poten yang berperan dalam regulasi serangan radikal bebas dan pencegahan terhadap kerusakan oksidatif yang disebabkan oleh peroksidasi lipid yang dapat berkontribusi pada integritas DNA spermatozoa. Selain itu, prolaktin (PRL) adalah salah satu hormon peptida yang juga merupakan faktor prosurvival spermatozoa melalui mekanisme supresi terhadap aktivasi protein kaspase, sehingga berperan dalam proteksi terhadap integritas DNA spermatozoa. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi pengaruh pemberian ALA dan PRL terhadap indeks fragmentasi DNA (IFD) dan status apoptosis spermatozoa(deteksi protein kaspase) setelah dilakukan pencucian spermatozoa dengan metode SU dan DGC. Metode: Sampel semen diperoleh dari 23 pria (normozoospermia) dari pasangan wanita infertil dan menjalani IUI. Analisis semen terhadap motilitas dan kecepatan dilakukan sebelum dan sesudah pencucian. Setelah pencucian spermatozoa dengan SU dan DGC, sampel kemudian diinkubasi pada berbagai konsentrasi ALA yaitu 0,625 mg (ALA 1), 1,25mg (ALA 2), 2,5 mg (ALA 3) dan pada berbagai konsentrasi PRL yaitu 500 ng (PRL 1), 750 ng (PRL 2), serta 1000 ng (PRL 3). Selanjutnya dilakukan uji sperm chromatin dispersion (SCD) untuk mengevaluasi fragmentasi DNA spermatozoa dan uji Western Blot untuk mendeteksiprotein kaspase. Hasil: Studi menunjukkan bahwa tingkat IFD spermatozoa setelah pemberian ALA dan PRL mengalami penurunan dibandingkan dengan sampel semensetelah dilakukan pencucian, bahkan dibandingkan dengan sampel semen sebelum pencucian.Protein kaspase ditemukan pada sampel semen sebelum pencucian maupun setelah pencucian dengan metode SU dan DGC. Metode SU dapat menyeleksi spermatozoa dengan IFD yang lebih rendah dibandingkan metode DGC pada konsentrasi optimal ALA dan PRL. Kesimpulan: ALA dan PRL terbukti dapat menyeleksi spermatozoa dengan kualitas spermatozoa yang lebih baik ditinjau dari indeks fragmentasi DNA dan level apoptosis yang lebih rendah, setelah dilakukan pencucian.
Kata kunci: alpha lipoicacid (ALA), prolaktin (PRL), swim-up, density gradient centrifugation, fragmentasi DNA spermatozoa, kaspase


Background: Several methods were done to improved the success rate of intra uterine insemination (IUI), some of them are Swim-Up (SU) and Density Gradient Centrifugation (DGC) sperm preparation, nevertheless the success rate still remain low. Alpha Lipoic Acid (ALA) is a potent biological antioxidant that play role in regulation of free radical attack and oxidative damage prevention caused by lipid peroxidation which ultimately contribute to DNA integrity of the sperm. Moreover, prolactin (PRL) is one of peptide hormones which also a prosurvival factor of sperm through suppression of activation of caspase protein mechanism, thus affecting sperm DNA integrity. This study aimed to evaluate the effect of ALA and PRL supplementation on DNA fragmentation (DFI) and apoptotic stateof the spermafter sperm preparation using SU and DGC methods. Method(s): Semen samples were obtained from 23 men (normozoospermia) from partners of women who infertile and underwent IUI. Semen analysis was performed for motility and velocity before and after sperm preparation. After SU and DGC sperm preparation, samples were incubated in concentration of ALA at 0,625 mg (ALA 1), 1,25mg (ALA 2),2,5 mg (ALA 3) and PRL at 500 ng (PRL 1), 750 ng (PRL 2), 1000 ng (PRL 3). The Sperm Chromatin Dispersion (SCD) test was performed to evaluate the sperm DNA fragmentation and Western Blot assay to detect the caspase protein. Result(s):Thisstudy confirmed that the level of sperm DNA fragmentation index (DFI) of sperm after supplementation of ALA and PRL were decreased compared to the sperm after preparation even compared to the whole semen. The presence of caspase protein was detected in whole semen samples,and after sperm preparation both SU and DGC, yet SU method could select the sperm with lower level of DNA fragmentation than the DGC method, both at the optimum concentration of ALA and PRL. Conclusion(s): ALA andPRL were proved to select the better sperm quality with lower level of sperm DNA fragmentation and minimum density of caspase protein after sperm preparation.
Keywords: alpha lipoic acid (ALA), prolactin (PRL), swim up, density gradient centrifugation, sperm DNA fragmentation, caspase