Text

Konstruksi dan ekspresi gen pre=membran dan envelope virus dengue serotipe 4 strain Indonesia sebagai kandidat vaksin DNA = Construction and expression of pre-membrane and envelope gene from dengue virus serotype 4 Indonesia strain as a DNA candidate.

Virus dengue (DENV) merupakan penyebab utama demam berdarah, terutama pada negara tropis termasuk Indonesia. Namun demikian, belum terdapat antivirus dan vaksin yang mampu mengobati atau mencegah infeksi virus tersebut. Penelitian bertujuan untuk memperoleh kandidat vaksin DENV-4 berbasis DNA menggunakan daerah gen pre-membran dan envelope (prM-E) yang diperoleh dari strain virus Indonesia. Penelitian ini merupakan bagian dari penelitian vaksin DNA tetravalen untuk DENV. Gen prM-E DENV-4 diamplifikasi, kemudian masing-masing diklon ke dalam vektor pUMVC4a dan pcDNA3.3 TOPO-TA, kemudian ditransfeksikan ke dalam sel Vero 76 dan CHO K1 dengan lipofectamine untuk mengetahui ekpresi protein yang dihasilkan. Ekspresi protein prM-E intraseluler dideteksi dengan IFA, sedangkan supernatan transfeksi dianalisis dengan metode ELISA dan Western blot untuk mengetahui keberadaan protein prM-E yang dilepaskan ke ekstraseluler. Hasil sekuensing DNA menunjukkan bahwa strain DENV-4 yang digunakan pada penelitian adalah genotipe II. Hasil Immunofluorescense assay menunjukkan bahwa sel positif tertransfeksi dan protein prM-E tetap dapat diamati hingga hari ketiga transfeksi, mengindikasikan bahwa konstruksi vaksin DENV-4 mampu diekspresikan pada sel mamalia. Hasil analisis ELISA menggunakan antibodi monoklonal antidengue menunjukkan bahwa OD supernatan transfeksi lebih tinggi daripada OD kontrol negatif, mengindikasikan bahwa terdapat protein prM-E DENV-4 yang dilepaskan oleh sel tertransfeksi ke ekstraseluler. Hasil analisis Western blot menunjukkan bahwa terdapat protein dengan ukuran sekitar 55 kDa, yang sesuai dengan berat protein E yang diharapkan. Diharapkan kandidat vaksin DNA DENV-4 yang diperoleh berpotensi sebagai vaksin untuk mencegah infeksi dengue di Indonesia.
Kata kunci: ekspresi protein; gen prM-E; konstruksi plasmid; vaksin DNA; virus dengue serotipe 4



Dengue virus (DENV) is a leading cause of morbidity and mortality in tropical countries, including Indonesia. However, there is no antiviral nor vaccine proved to cure or prevent the infection. The aim of this study is to produce DENV-4 vaccine DNA candidate using pre-membrane and envelope (prM-E) gene originated from Indonesian strain. This research is a part of a research project on dengue DNA tetravalent vaccine. Amplified prM-E genes were each cloned into pUMVC 4a vector and pcDNA3.3 TOPO-TA, and were transfected into Vero 76 and CHO K1 cells respectively by lipofectamine in order to know the protein expression. Intracellular prM-E protein expression was detected by IFA, while extracellular protein was detected by ELISA and Western blot. DNA sequencing results showed that DENV-4 used in this research is in genotype II. Immunofluorecense assay results showed that the cells were positively transfected and dengue protein still could be detected until third day post-transfection, indicating the prM-E DENV-4 construct has been expressed in the cells. ELISA using anti-dengue monoclonal antibody showed that culture fluid of transfected cells had a higher OD than the negative control, indicating the E protein from transfected cells had been released out of the cells. Western blot results showed that there was a protein band detected about 55 kDa in size, which is in similiar size with the desirable E protein. We hope this DNA DENV-4 could be a candidate for DENV vaccine to prevent DENV infection in Indonesia.
Key words: dengue virus serotype 4; DNA vaccine; plasmid construction; preM- E gene; protein expression